三種方法提取血清外泌體的比較研究
日期：2023-05-26 11:12:39
外泌體包含了多種生物活性分子，如RNA、蛋白質、代謝產物等。血清外泌體中的這些成分對于疾病的診斷和治療等方面有著廣泛的應用前景。本文將介紹三種方法提取血清外泌體的比較研究，希望為相關研究提供參考。
1、速離心法
超速離心法是目前最常用的一種提取血清外泌體的方法。具體操作步驟如下：
(1) 取血液樣品，離心去除細胞和碎片，獲得血漿；
(2) 對血漿使用不同的離心參數和時間進行超速離心，以獲取外泌體團塊；
(3) 經過再次離心和洗滌，用PBS緩沖液再次懸浮外泌體團塊以獲取純凈外泌體。
超速離心法 徑濾膜法操作簡單，適用于大規模制備，但存在一定的缺點。首先，因為超速離心的原理是根據體積和密度分離，所以無法完全區分出外泌體和其他蛋白質團塊；其次，超速離心所需的離心機較為昂貴，不適用于一些小型實驗室。
2、徑濾膜法
大孔徑濾膜法是通過篩選外泌體大小進行提取。具體操作步驟如下：
(1) 取血液樣品，離心去除細胞和碎片，獲得血漿；
(2) 在血漿中加入大孔徑濾膜（如0.22um或0.45um），進行過濾，獲得外泌體富集的濾液；
(3) 通過再次過濾和洗滌，用PBS緩沖液再次懸浮外泌體以獲取純凈外泌體。
徑濾膜法操作簡便，適用于小規模制備，但其缺點在于不能直接對外泌體進行定量檢測。
3、親和法
免疫親和法是根據外泌體表面的特定蛋白結構選擇性地識別和富集外泌體的方法。具體操作步驟如下：
(1) 取血液樣品，離心去除細胞和碎片，獲得血漿；
(2) 在血漿中加入外泌體表面膜蛋白的抗體或親和分子，將外泌體蛋白質選擇性富集并固定在試劑上；
(3) 再次離心和洗滌，用PBS緩沖液再次懸浮外泌體以獲取純凈外泌體。
親和法能夠選擇性地識別目標蛋白質，提高了外泌體提取的純度，但其缺點在于需要特定的抗體或親和劑，所以適用范圍相對較窄。
綜合比較三種提取血清外泌體的方法，超速離心法最為常用，具有簡便易行、適用于大規模制備的優點。而大孔徑濾膜法雖然操作簡便，但存在無法直接定量檢測外泌體及低純度的問題。
免疫親和法具有選擇性富集的優點，但需要特定的抗體或親和劑，適用范圍較小。因此，在選擇合適的提取方法時，需根據具體實驗需求進行選擇。
上一篇： elisa標準曲線該用什么參數擬合？
下一篇： 免疫檢查點抑制劑的作用機制
