哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)與純化
原核表達(dá)系統(tǒng)具有表達(dá)水平高、操作簡(jiǎn)單、周期短、易于大規(guī)模高密度培養(yǎng)、成本低等優(yōu)點(diǎn)，而對(duì)于全長(zhǎng)抗體和糖蛋白類生物藥物來說，表達(dá)產(chǎn)物多肽鏈的折疊、二硫鍵的形成、糖基化的有無以及糖基化的類型常常影響表達(dá)產(chǎn)物的合成分泌、生物活性、體內(nèi)穩(wěn)定性以及免疫原性等特性。
與其它真核細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)相比，目的基因在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中表達(dá)的蛋白與天然蛋白的結(jié)構(gòu)、糖基化類型和方式幾乎相同且能正確組裝成多亞基蛋白。
系統(tǒng)優(yōu)勢(shì)
- 無自產(chǎn)內(nèi)毒素；
- 可以分泌表達(dá)；
- 具有復(fù)雜的N型糖基化和準(zhǔn)確的O型糖基化等多種翻譯后加工功能；
- 在分子結(jié)構(gòu)、理化性質(zhì)和生物學(xué)功能等方面，哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)的蛋白最接近于天然蛋白。
服務(wù)優(yōu)勢(shì)
- 高性價(jià)比，價(jià)格低至至8600元起；
- 貨期短：最短35工作日即可交付；
- 產(chǎn)量高，最高可達(dá)100mg/L。
我們承諾
注：該無風(fēng)險(xiǎn)定制蛋白服務(wù)僅適用于800個(gè)氨基酸以內(nèi)的蛋白質(zhì)。如果您需要表達(dá)超過800個(gè)氨基酸的蛋白質(zhì)，我們將按步驟收費(fèi)。
服務(wù)內(nèi)容
| 步驟 | 服務(wù)項(xiàng)目 | 服務(wù)說明 | 華美生物特色 | 周期 |
|---|---|---|---|---|
| 1 | 質(zhì)粒構(gòu)建
 |
密碼子優(yōu)化全基因合成 | 多載體優(yōu)化 為了提高的表達(dá)成功率以及獲得更高表達(dá)量，除常規(guī)N端融合表達(dá)蛋白外，我們還提供C端融合標(biāo)簽，在確保純度的同時(shí)更大程度保證了蛋白的活性。 |
8-11工作日 |
| PCR擴(kuò)增產(chǎn)物酶切連接到pSec系列、pCMV系列、pCDNA等系列載體上 | ||||
| 轉(zhuǎn)化TOP10宿主 | ||||
| 獲得測(cè)序正確的重組質(zhì)粒 | ||||
| 2 | 小試表達(dá)
 |
轉(zhuǎn)染級(jí)重組質(zhì)粒大量制備 | 轉(zhuǎn)染條件優(yōu)化 設(shè)置不同的轉(zhuǎn)染條件，根據(jù)檢測(cè)結(jié)果，選擇最優(yōu)的實(shí)驗(yàn)條件。 |
3-5工作日 |
| 小體積瞬轉(zhuǎn)HEK293、CHO 等細(xì)胞 | ||||
| 檢測(cè)表達(dá)產(chǎn)物 | ||||
| 3 | 擴(kuò)大表達(dá)與純化
 |
擴(kuò)大培養(yǎng)細(xì)胞并轉(zhuǎn)染 | 多條件表達(dá)方案 根據(jù)小試表達(dá)中蛋白定位情況及最佳實(shí)驗(yàn)條件，針對(duì)性選擇不同的細(xì)胞系進(jìn)行懸浮或者貼壁擴(kuò)大轉(zhuǎn)染，大大提高蛋白表達(dá)量。 |
6-8工作日 |
| 通過親和、離子交換、疏水及分子篩等多種層析方法純化目的蛋白 | ||||
| 4 | 其他（可選）
 |
通過酶切去除標(biāo)簽 | 靈活的附加服務(wù)（可選） 提供多種附加服務(wù)，客戶可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求靈活選擇 |
3個(gè)工作日 |
| 所有蛋白都可以提供無菌 操作和內(nèi)毒素去除服務(wù) |
2個(gè)工作日 | |||
| 5 | 質(zhì)控
 |
進(jìn)行純度、濃度等檢查，并提供QC報(bào)告 | 詳細(xì)的質(zhì)控報(bào)告 為每個(gè)項(xiàng)目提供產(chǎn)品說明書及完善的質(zhì)控報(bào)告 |
3-5工作日 |
| 總時(shí)間 | 20-30工作日 | |||
特色技術(shù)平臺(tái)
VLPs是由多個(gè)病毒的一種或者多種衣殼蛋白自動(dòng)組裝形成的納米級(jí)別的微小顆粒。VLPs顆粒不含病毒核酸，不能進(jìn)行自主復(fù)制，安全性高，具有與病毒顆粒類似的整體結(jié)構(gòu)。
華美生物搭建了基于HEK293表達(dá)系統(tǒng)的包膜VLPs技術(shù)平臺(tái)，所制備的包膜VLPs在其固有的囊泡膜上顯示正確折疊的多次跨膜蛋白，展示完整的生物活性。
特色表達(dá)體系
● pSecTag2A-JT載體+HEK293細(xì)胞高效表達(dá)
- 攜帶有CMV強(qiáng)啟動(dòng)子，含有IgK信號(hào)肽可高效分泌表達(dá)；
- N端含有10xHis較常規(guī)6xHis在IMAC中具有更強(qiáng)結(jié)合能力，同時(shí)含有凝血酶位點(diǎn)可去除標(biāo)簽得到無標(biāo)簽蛋白；
- C端含有MYC-tag可應(yīng)用于標(biāo)簽WB檢測(cè)，較His-tag具有更強(qiáng)靈敏度；
- Amp抗性篩選。
案例展示
案例1：哺乳動(dòng)物表達(dá)系統(tǒng)高表達(dá)目的蛋白
眾所周知，哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)量比較低，該蛋白經(jīng)過我公司的哺乳動(dòng)物表達(dá)系統(tǒng)優(yōu)化表達(dá)后，將培養(yǎng)基上清進(jìn)行SDS-PAGE檢測(cè)即可觀察到目的條帶，純化后經(jīng)檢測(cè)，蛋白表達(dá)量高達(dá)10mg/L。該蛋白理論分子量大小為42kDa，跑膠顯示有糖基化修飾，后經(jīng)LC-MS/MS進(jìn)一步檢驗(yàn)得到確認(rèn)。
蛋白純化圖
泳道1：穿透液
泳道2：培養(yǎng)基原液
泳道3：Marker
泳道4：20 mM咪唑洗脫液
泳道5：60 mM咪唑洗脫液
案例2：哺乳動(dòng)物表達(dá)系統(tǒng)高表達(dá)全長(zhǎng)抗體
三種全長(zhǎng)抗體采用我公司的載體轉(zhuǎn)染HEK293/CHO細(xì)胞后，經(jīng)SDS-PAGE檢測(cè)，可以在培養(yǎng)基上清中看到明顯的條帶，兼顧周期及產(chǎn)量，瞬轉(zhuǎn)表達(dá)產(chǎn)量可達(dá)100mg/L 。
蛋白純化圖
泳道1：抗體1培養(yǎng)基原液
泳道2：抗體1穿透液
泳道3：抗體1洗脫液
泳道4：抗體2培養(yǎng)基原液
泳道5：抗體2穿透液
泳道6：Marker
泳道7：抗體2洗脫液
泳道8：抗體3培養(yǎng)基原液
泳道9：抗體3穿透液
泳道10：抗體3洗脫液
聯(lián)系信息
電話：027-87002556
Q Q：1031906505 
地址：武漢市東湖新技術(shù)開發(fā)區(qū)高新大道818號(hào)高科醫(yī)療器械園B11號(hào)2樓
華美生物︱YOUR GOOD PARTNER IN BIOLOGY RESEARCH!
武漢華美生物工程有限公司成立于2007年12月，是一家集科研、生產(chǎn)、銷售為一體的生物高新技術(shù)企業(yè)。并形成了以CUSABIO為品牌的ELISA試劑盒、蛋白、抗體等多種優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品，遠(yuǎn)銷歐美日德等九十多個(gè)國(guó)家。
推薦您微信關(guān)注華美官方公眾號(hào)，方便查詢產(chǎn)品，同時(shí)獲取生命科學(xué)更新資訊！
