外泌體中的miRNA提取
日期：2023-06-19 16:12:20
外泌體（extracellular vesicle，EV）具有信息傳遞和調(diào)節(jié)功能。EV中含有豐富的生物活性物質(zhì)，包括蛋白質(zhì)、核酸、肽類等。其中，miRNA是一類長(zhǎng)度約為22nt的小RNA，在細(xì)胞的發(fā)育、生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)化和毒理等過(guò)程中扮演著重要的角色。然而，由于EV中miRNA的含量很少，因此對(duì)EV中miRNA的提取是研究的關(guān)鍵步驟之一。以下簡(jiǎn)要介紹了目前常用的三種EV中miRNA提取方法。
方法一：商業(yè)化試劑盒
商業(yè)化試劑盒是目前最常用的EV中miRNA提取方法之一。這種方法基于慢鎮(zhèn)靜離心（ultracentrifugation）和柱層析（column chromatography）等技術(shù)，可以通過(guò)化學(xué)反應(yīng)和特定試劑的選擇，高效地從EV中提取miRNA。其主要優(yōu)勢(shì)在于操作簡(jiǎn)單、易于標(biāo)準(zhǔn)化、重復(fù)性好等方面。目前市場(chǎng)上銷售的商業(yè)試劑盒品種豐富，價(jià)格也較為合理，因此深受廣大研究者的喜愛(ài)。
方法二：超濾法
超濾法是基于膜分離技術(shù)的miRNA提取方法，可以通過(guò)在某些聚合物膜上設(shè)定特定孔徑大小，將EV分離并收集所需要的miRNA。與其他方法相比，超濾法具有提取效率高、操作簡(jiǎn)單、成本低等優(yōu)勢(shì)，但由于需要使用較為昂貴的超濾膜和磁珠等材料，因此在實(shí)際應(yīng)用中受到限制。
方法三：電泳法
電泳法是通過(guò)電場(chǎng)作用促進(jìn)miRNA遷移的方法，通過(guò)其在電場(chǎng)中的運(yùn)動(dòng)特性，可將目標(biāo)miRNA從EV中分離和提取。這種方法需要對(duì)樣品進(jìn)行預(yù)處理，包括低滲溶液（hypotonic buffer）處理、電泳緩沖液（electrophoresis buffer）處理等，而且儀器設(shè)備相對(duì)較為昂貴。但是，電泳法可以有效避免某些化學(xué)方法中可能存在的干擾因素，對(duì)于一些高凈化純度的樣品具有較好的適用性。
在實(shí)際應(yīng)用過(guò)程中，提取EV中miRNA要考慮到樣品的來(lái)源和性質(zhì)、試劑的選擇和使用、操作的規(guī)范化等方面，以確保提取的miRNA質(zhì)量和數(shù)量達(dá)到要求。同時(shí)，還需要對(duì)提取后的miRNA進(jìn)行質(zhì)檢、純化和定量等處理，以確保其能夠滿足后續(xù)的研究需求。
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