泛素化酵母雙雜交原理
日期：2023-07-14 16:59:20
泛素化酵母雙雜交（ubiquitin-based yeast two-hybrid）是一種用于研究蛋白質相互作用的實驗方法。其原理基于以下幾個關鍵步驟：
構建表達載體：將目標基因的編碼區域連接到一個包含泛素序列的表達載體上。這樣，在目標基因翻譯產生的融合蛋白中，泛素序列會緊密連接在其N-末端。
融合蛋白表達：將構建好的表達載體導入酵母細胞，并利用適當的誘導劑刺激目標基因的表達，從而使細胞內產生融合蛋白。
靶蛋白與泛素酶相互作用：泛素酶（E3酶）在細胞中負責泛素化作用，將泛素共價連接到目標蛋白上。在泛素化酵母雙雜交中，使用的泛素酶通常是酵母細胞自身的E3酶。
活性酶域重組：當目標蛋白被泛素化后，在酵母細胞中的特定酶域（例如，埃爾氏酵母中的乙酰膽堿酯酶）可與泛素連接的蛋白發生特異性相互作用。
雙雜交檢測：通過對酵母細胞進行適當的選擇篩選，識別出與目標蛋白相互作用的酶域。常用方法包括生長選擇實驗和報告基因檢測等。
通過這種方法，我們可以鑒定目標蛋白與其他蛋白之間的物理相互作用，并進一步研究與其相關的信號通路、調控機制等生物學問題。
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