哺乳動物表達系統原理流程步驟
日期：2023-07-26 10:31:31
哺乳動物表達系統是一種用于在哺乳動物細胞中產生外源蛋白的方法，具有廣泛的應用。以下是哺乳動物表達系統的原理：
基因克隆：首先，將目標基因的DNA序列克隆到適當的表達載體上。表達載體通常包括啟動子、轉錄終止子和選擇標記等功能元件。
細胞培養：將所構建的表達載體導入到哺乳動物細胞中，可以選擇多種不同類型的哺乳動物細胞，如CHO細胞、HEK293細胞等。細胞培養通常在培養皿或發酵罐中進行，提供適當的培養基和條件。
轉染和選擇：使用合適的方法將表達載體導入目標細胞內，例如化學法、電穿孔法、病毒載體轉染等。然后，通過添加適當的選擇抗生素或其他篩選方法，選擇那些成功表達了目標基因的細胞。
表達與分泌：在成功轉染的細胞中，表達載體會被細胞內的轉錄和翻譯系統識別并轉錄成mRNA，然后翻譯成蛋白質。如果表達載體包含了信號肽序列，這些蛋白質可能會被定向到細胞外分泌。
蛋白純化與分析：在目標蛋白質表達和分泌后，可以通過各種蛋白純化技術（如親和層析、凝膠過濾、離子交換層析等）對其進行純化。然后可以使用各種方法對目標蛋白質進行檢測、定量和結構分析。
哺乳動物細胞表達系統利用哺乳動物細胞的轉錄和翻譯機制，使得外源基因能夠在細胞內轉錄和翻譯成蛋白質。通過選擇合適的細胞系、合適的表達載體和適當的培養條件，可以實現高效、穩定地表達外源蛋白，并進一步對其進行純化和分析。這為研究蛋白質功能、藥物篩選和生物制藥等領域提供了重要工具。
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