超濾離心提取外泌體步驟
日期：2023-05-29 16:29:52
超濾離心法是一種常用的外泌體提取方法，通過使用不同的分子量切點濾膜，可以有效地分離和富集各種大小的外泌體，從而方便后續分析和應用。
以下是超濾離心提取外泌體的詳細步驟：
1、采集培養基或血漿等含有外泌體的樣品，并進行預處理。首先，利用一些基本的生物學技術和試劑，去除樣品中的細胞碎片、蛋白酶和核酸等干擾物質。例如，可以進行低速離心去除細胞碎片，加入蛋白酶抑制劑和核酸酶等去除蛋白質和核酸污染等。
2、將預處理后的樣品進行低速離心，以去除未破裂的細胞和碎片等。通常使用300 × g或500 × g等相對低速度離心10-20分鐘，收集上清液。
3、再將上清液進行高速離心，目的是將外泌體等細胞外囊泡沉積下來。通常使用1500 × g或2000 × g等的相對高速度離心30-40分鐘，收集沉淀。注意，不同技術和實驗條件下，高速離心的時間和速度可能有所不同。
4、將外泌體沉淀洗滌，以去除殘留的蛋白酶、核酸酶等污染物。一般使用緩沖鹽水或PBS等洗滌液，輕柔地重新懸浮沉淀，加入洗滌液后再進行低速離心去除殘余污染物。
5、將洗滌后的外泌體樣品進行超濾分離，以去除更大的碎片和細胞等雜質，同時富集外泌體并控制其大小分布。對于超濾離心法，可以選擇不同的分子量切點濾膜，如100 kDa，50 kDa等，以分離不同尺寸的外泌體。將樣品置于篩選裝置中，如Amicon Ultra-15聚丙烯酰胺離心管，以適當的速度離心。離心過程中，分子量小于切點的蛋白質和外泌體會通過濾膜進入下部收集室，分子量大于切點的物質則被截留在膜上。通常使用1-2 mL的樣品進行超濾，離心速度和時間取決于使用的濾膜型號和診斷儀器等。
6、將超濾液進行洗滌和純化，以提高外泌體的純度和質量。可以采用不同的方法進行進一步的純化操作，如封閉顆粒提取法、親和層析法等，根據具體情況進行選擇。
超濾離心是一種強大的外泌體提取方法，能夠有效地富集外泌體并去除雜質。按照上述步驟操作，可以獲得高純度的外泌體樣品，為后續的分子生物學和生物醫學研究提供了有力的基礎。
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